董五辈
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主要从事于抗菌基因的分离克隆和植物-微生物互作应用工程。利用我们建立的新技术从植物及生防菌中分离克隆抗菌基因。利用我们克隆到的新基因转化植物及生防菌。我们已成功克隆到了十多个抗菌新基因并获得了抗病转基因玉米。我们已建立了下面的新技术理论。
1. RNAi功能互补技术 (RNAi rescue strategy)
根据密码子的Wobble hypothesis,我们把编码同一蛋白的基因序列分别构建到RNAi载体和超表达载体,使其基因序列差异超过80%,但仍编码同一蛋白。然后,把这两个载体同时转入植物观察RNAi后基因的功能能否恢复(The Plant Cell. 2006, 18:3321-3331)。
2. 基因消除PCR (Removing PCR, R-PCR)
基因扩增PCR逆向过程的一种去除非目标基因的新技术。在PCR反应中,每一循环目标基因得到了扩增;在基因消除PCR反应中,每一循环非目标基因得到了去除。如果你想扩增你想要的基因,你可用PCR;如果你想去除你不想要的基因,你可用基因消除PCR (Sci. Rep. 2013, 3:2303; Sci. Rep. 2017, 7:1777; Microbiol. Res. 2021, 242:126639)。
3. One-for-All文库杂交技术 (Yeast library-hybrid assay, YLH)
在一个实验流程中可同时系统高效筛选全基因组中理论上所有的转录因子和蛋白互作(一次实验建立两个数据库),是构建基因调控互作系统遗传网络的理想策略 (Agri Gene, 2016, 1:15-22)。
4. F1非我抗性技术:基于非我识别及杂种优势建立了一项超越病原物克服抗性机制的,通过生产F1种子产生持久抗性的新技术理论(BMC Plant Biology. 2018, 18:357)。
5. 指示菌内置文库抗性基因筛选技术:把基因表达文库(相当于一次数千个基因蛋白)转入病原指示菌体内,让这些蛋白在指示菌内部起作用(高度灵敏),从而高效灵敏地筛选克隆抗菌基因(Sci. Rep. 2018, 8:14514; Biomolecules 2019, 10, 30; Front. Microbiol. 2020, 11:1353; Int. J. Mol. Sci. 2020, 2021, 2022)